Принципы санитарно микробиологических исследований исключают. Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований
Дополнительный материал к занятию.
Санитарная микробиология – раздел медицинской микробиологии, изучающей микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека. Санитарная микробиология разрабатывает методы контроля за состоянием воды, почвы, воздуха, пищевых продуктов и различных предметов обихода. Одновременно санитарная микробиология разрабатывает микробиологические нормативы и мероприятия по оздоровлению окружающей среды.
Практическая санитарная микробиология использует 2 основных метода оценки санитарно-эпидемиологического состояния внешней среды: прямое обнаружение патогенных микроорганизмов и выявление косвенных признаков пребывания патогенов во внешней среде.
Непосредственное обнаружение патогенных микроорганизмов, как правило, затруднено из-за их малого количества и проводится по эпидпоказаниям. Косвенные методы – это определениеобщей микробной обсеменённости илиобщего микробного числа (ОМЧ), а также определение и титрованиесанитарно-показательных микроорганизмов (СПМ), которые регулярно проводятся контролирующими органами с целью определения безопасности объектов для здоровья населения.
ОМЧ расценивается как показатель интенсивности загрязнения окружающей среды органическими веществами.
Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде.
Санитарно-показательные микроорганизмы
должны удовлетворять следующим характеристикам
1. Постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и выделяться в окружающую среду.
2. Не должны размножаться вне организма, исключая пищевые продукты.
3. Длительность их выживания в окружающей среде должна быть не меньше и даже несколько больше, чем у патогенных микроорганизмов.
4. Устойчивость санитарно-показательных микроорганизмов в окружающей среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов.
5. У санитарно-показательных микроорганизмов не должно быть в окружающей среде «двойников».
6. Микроб не должен изменяться в окружающей среде.
7. Методы индикации и идентификации санитарно-показательных микроорганизмов должны быть простыми.
(предусматривают определение общей микробной обсеменённости (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов).
Санитарно-микробиологическое состояние воздуха закрытых помещений оценивают по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству особей, обнаруживаемых в 1 м 3 воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий: гемолитических стрептококков, золотистых стафилококков, а также дрожжевых и плесневых грибов.
Согласно СанПиН 2.1.3.1375-03, воздушная среда помещений лечебных учреждений и аптек по уровню бактериальной обсемененности разделена на 4 класса.
Микробиологические показатели для оценки воздушной среды аптечных учреждений можно определить путем посева воздуха седиментационным (по Коху) или аспирационным методом (в аппарате Кротова).
Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их
функционального назначения и класса чистоты
| Класс чистоты | Название помещений | Санитарно-микробиологические показатели | |||||
| общее количество микроорганизмов в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3) | количество колоний S.aureus в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3) | количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 дм 3 воздуха | |||||
| До начала | Во время работы | До начала | Во время работы | До начала | Во время работы | ||
| Особо чистые(А) | Операционные, родильный зал, асептические боксы для гематологических, ожоговых больных, палата для недоношенных, асептический блок аптек, стерилизационные (чистая половина) боксы бактериологических лабораторий | не более200 | не более500 | не должно быть | не должно быть | не должно быть | не должно быть |
| Чистые(Б) | Процедурные, перевязочные, предоперационные, палаты реанимации, залы реанимации, детские палаты, комнаты сбора и пастеризации грудного молока, ассистентские и фасовочные аптек, дистилляторная,помещения бактериологических и клинических лабораторий, предназначенные для исследований | не более500 | не более750 | не должно быть | не должно быть | не должно быть | не должно быть |
| Условно чистые(В) | Палаты хирургических отделений; коридоры, примыкающие к операционным и родильным залам; смотровые, боксы и палаты инфекционных отделений, ординаторские, материальные, кладовые чистого белья | не более750 | не более1000 | не должно быть | не более2 | не должно быть | не должно быть |
| Грязные (Г) | Коридоры и помещения административных зданий, лестницы, лечебно-диагностические, санитарные комнаты, туалеты, комнаты грязного белья | Не нормируются |
Седиментационный метод (по Коху) – оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха. Он заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на определённое время (5-10 минут на общую обсеменённость и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, маркируют и выдерживают 24 часа в термостате и 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязнённости воздуха: по приблизительному подсчёту на площадь 100 см 2 в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.
Аспирационный метод – более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов. Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.
После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:
| ОМЧ | = | N ∙ 1000 |
| V |
где N – количество выросших на чашке колоний;
V – объём пропущенного через прибор воздуха, дм 3 ;
1000 - искомый объём воздуха, дм 3 .
Наличие санитарно-показательных для воздуха микроорганизмов – золотистого стафилококка, гемолитического стрептококка, плесневых грибов, кандид – определяют по характеру выросших колоний на специальных средах (желточно-солевом агаре, кровяном агаре, среде Сабуро) и при микроскопическом изучении бактерий из этих колоний.
Контрольные вопросы.
Каковы особенности ферментных систем бактерий? Виды ферментов: по их действию; по выделению в окружающую среду; конститутивные и адаптивные ферменты. Какое практическое значение имеет изучение ферментативной активности бактерий? Методы изучения протеолитической и сахаролитической активности бактерий. Дифференциально-диагностические среды: перечислите, назовите основные составные части и применение. На какое изменение среды реагирует индикатор в этих средах? По какому признаку дифференцируются бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева? Каким свойством должны обладать бактерии, чтобы образовать на этих средах окрашенные колонии? Если бактерии образуют бесцветные колонии, что это значит? Среды Гисса, их состав и применение. Что такое «пёстрый» или «цветной» ряд? Среда Олькеницкого, как производится посев и как отмечают на этой среде ферментативные свойства бактерий? Методы определения протеолитической активности бактерий: разжижение желатина, образование индола, сероводорода, аммиака. Что представляют собой микротестсистемы для определения ферментативной активности бактерий: как производят посев и как учитывают результаты? Что такое СИБ, как используется эта система, как производится посев и учёт результатов?Микрофлора воздуха: какие микробы чаще всего встречаются, как меняется микрофлора в зависимости от условий. Что такое микробное число воздуха, какими методами оно определяется? Что такое санитарно-показательные микроорганизмы? Какие микробы считаются санитарно-показательными для воздуха? Какие патогенные микробы могут передаваться через воздух?Определите понятия: нормальная микрофлора организма человека; постоянная микрофлора; транзиторные микроорганизмы; потенциально опасные микроорганизмы. Назовите органы и ткани, свободные от постоянной микрофлоры. Какие микробы относятся к постоянной микрофлоре полости рта и какое значение имеют в норме и патологии? Характеристика микрофлоры различных областей организма: полости рта, желудочно-кишечного тракта, органов дыхания. Значение нормальной микрофлоры - положительное и отрицательное. Что такое дисбактериоз, в чём он выражается, причины его возникновения и способы предупреждения и устранения. Назовите препараты, применяемые для устранения дисбактериоза, что они содержат, как применяются, что с ними происходит в организме человека.
Задание на самостоятельную работу.
1. Выпишите названия (по-латыни) видов санитарно-показательных микроорганизмов для воздуха.
2. Напишите названия препаратов, применяемых для устранения дисбактериоза, их состав, применение.
Работа студента на практическом занятии.
1. Выделение чистой культуры бактерий - окончание (3 день). Посмотрите свои посевы предыдущего занятия, приготовьте мазки, окрасьте по Граму в модификации Синёва, промикроскопируйте, сделайте вывод о чистоте выделенной культуры.
2. Изучение ферментативной активности бактерий. Учет результатов определения ферментативной активности бактерий на средах Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой и на среде Олькеницкого. (Демонстрация).
3. Ознакомьтесь с микро-тестсистемами, СИБ.
4. Приготовьте мазок из зубного налета: предметное стекло нанести бактериологической петлей каплю физиологического раствора. Стерильной заостренной деревянной палочкой возьмите у себя зубной налет, внесите в каплю. Приготовьте мазок после высушивания и фиксации окрасьте по Граму в модификации Синёва, микроскопируйте, зарисуйте. Сделайте вывод.
5.Исследование микрофлоры воздуха. Произведите посев воздуха в лаборатории седиментационным методоми с помощью аппарата Кротова.
ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
«КАЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И
СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ
Санитарная микробиология
Для студентов медицинских вузов
Казань 2011
УДК 579.63:614.(075.8)
ББК 51.201.7я73
Печатается по решению Центрального координационно-методического совета Казанского государственного медицинского университета
Составители - сотрудники кафедры микробиологии:
профессор О.К.Поздеев, профессор Л.Т.Мусина, доцент А.Н.Савинова,
доцент Е.Р.Федорова, доцент Г.Ш.Исаева, ст. преподаватель С.Б.Богданова,
ассистент Ю.В.Валеева
Рецензенты:
Доцент кафедры микробиологии Казанской государственной медицинской
академии к.б.н. Л.В. Кипенская
Доцент кафедры эпидемиологии Казанского государственного медицинского университета к.м.н. Н.М. Хакимов
Санитарная микробиология. Учебное пособие для студентов медицинских вузов/ О.К.Поздеев, Л.Т.Мусина, А.Н.Савинова, Е.Р.Федорова, Г.Ш.Исаева, С.Б.Богданова, Ю.В.Валеева - Казань: КГМУ, 2011 - 101 с.
Учебное пособие предназначено студентам медицинских вузов для самостоятельного изучения основных разделов санитарной микробиологии. Пособие составлено в соответствии с официально утвержденными программами преподавания микробиологии в медицинских вузах и документами, регламентирующими исследования по санитарной микробиологии. В пособии учтены современные нормативные документы по исследованию воды, воздуха, почвы, пищевых продуктов и ЛПО. Пособие содержит методики санитарно-микробиологического контроля различных объектов, цели и задачи лабораторных занятий, направленных на освоение общекультурных и профессиональных компетенций, учебные карты занятий, вопросы для самоподготовки и самоконтроля, ситуационные задачи и тесты.
Казанский государственный медицинский университет, 2011
1. Список сокращений…………………………………………………………… 4
2. Вводные представления…………………………………………………………5
3. Микрофлора воды………………………………………………………………..9
4. Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды централизованного водоснабжения………………………………….…………11
5. Выявление Legionella pneumophila в объектах окружающей среды………...17
6. Микрофлора воздуха……………………………………………………………..23
7. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха в
лечебно-профилактических организациях (ЛПО)……………...……………...25
8. Микрофлора почвы………………………………………………………………30
9. Санитарно-микробиологическое исследование почвы………………………..32
10. Санитарно-микробиологическое исследование пищевых продуктов………...39
11. Основные методы определения санитарно-показательных микробов в
пищевых продуктах ………………………………………………………………40
12. Микрофлора молока и молочных продуктов……………………………………41
13. Микрофлора мяса и мясных продуктов………………………………………….47
14. Исследование мяса……………………………………………………………...... 47
15. Санитарно-микробиологическое исследование полуфабрикатов и готовых
изделий из рубленого мяса………………………………………………………..49
16. Санитарно-микробиологическое исследование колбасных изделий и
продуктов из мяса…………………………………………………………………49
17. Санитарно-микробиологическое исследование рыбы…………………………50
18. Санитарно-микробиологическое исследование напитков……………………..51
19. Санитарно-микробиологическое исследование консервов……………………52
20. Санитарно-микробиологические исследования в лечебно-профилактических
организациях (ЛПО)……………………………………………..……………..…58
21. Санитарно-микробиологические исследования в стационарах
(отделениях) хирургического профиля………….……………………………….58
22. Санитарно-микробиологические исследования в стационарах (отделениях)
акушерского профиля и перинатальных центров………………………………59
23. Санитарно-микробиологические требования к стоматологическим
медицинским организациям……………………………………………………..60
24. Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и
эксплуатации фельдшерско-акушерских пунктов (ФАП)……………………..61
25. Лабораторные исследования в ЛПО…………………………………………….61
26. Микробиологический контроль аптек…………………………………………..67
27. Тесты по санитарной микробиологии…………………………………………..83
28. Список литературы……………………………………………………………….100
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БГКП - бактерии группы кишечной палочки
БОЕ - бляшкообразующие единицы
ГОБ - грамотрицательные бактерии
ГОСТ - государственный стандарт
ГПС - глюкозо-пептонная среда
ЖСА - желточно-солевой агар
ЖСТ - желточная среда Турчинского
КМАФАМ - количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных
микроорганизмов
КОЕ - колониеобразующие единицы
ЛПО - лечебно-профилактические организации
ЛПС - лактозо-пептонная среда
МАФАМ - мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные
микроорганизмы
МАФАнМ - мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные
микроорганизмы
МЖСА - молочно-желточно-солевой агар
МИС - молочно-ингибиторная среда
МКТ - Мюллера-Кауфмана тетратионатный бульон
МПА - мясо-пептонный агар
МПБ - мясо-пептонный бульон
МСА - молочно-солевой агар
МУК - методические указания
ОКБ - общие колиформные бактерии
ОМЧ - общее микробное число
ПБЛ - питательный бульон для листерий
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РА - реакция агглютинации
СанПиН - санитарные правила и нормативы
СП - санитарные правила
СПМ - санитарно-показательные микроорганизмы
ТКБ - термотолерантные колиформные бактерии
ТР - технический регламент
УФ - ультрафиолетовые лучи
ЦРБ - Центральная районная больница
ЩЭС - щелочная элективная среда с полимиксином
XLD - ксилоза-лизин декстрозный агар
RVS - среда Раппопорта-Вессилиадиса с соей
ВВОДНЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ
Санитарная микробиология - направление медицинской микробиологии, изучающее микрофлору окружающей среды и её влияние на здоровье человека и состояние среды его обитания. Началом развития санитарной микробиологии можно считать 1883 г., когда французский врач Э. Масе предложил рассматривать кишечную палочку как показатель фекального загрязнения воды. Изучение микрофлоры и микробиологических процессов в среде обитания человека необходимо для гигиенической оценки его взаимоотношений с окружающей средой.
Знания, умения и навыки, полученные при изучении санитарной микробиологии, способствуют выработке таких общекультурных и профессиональных компетенций, как:
1. Способность и готовность анализировать социально-значимые проблемы и процессы, использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОК -1)
3. Способность и готовность применять методы асептики и антисептики, использовать медицинский инструментарий, проводить санитарную обработку лечебных и диагностических помещений медицинских организаций (ПК-7).
4.Способность и готовность использовать нормативную документацию, принятую в здравоохранении (законы Российской Федерации, технические регламенты, международные и национальные стандарты, приказы, рекомендации, терминологию, международные системы единиц (СИ), действующие международные классификации), а также документацию для оценки качества и эффективности работы медицинских организаций (ПК-27).
Основные задачи санитарной микробиологии:
1. Изучение микробных биоценозов во внешней среде
2. Обнаружение во внешней среде патогенных микробов или их токсинов.
3. Обнаружение во внешней среде условно-патогенных микроорганизмов, являющихся косвенными показателями загрязнения изучаемых объектов патогенными микробами.
4. Выявление во внешней среде микроорганизмов, являющихся причиной порчи пищевых продуктов, сырья, строительных материалов.
5. Выработка нормативов, характеризующих гигиеническое состояние объектов внешней среды.
Санитарно – микробиологические исследования проводят:
1. При проведении текущего санитарного надзора
2. При решении вопросов о возможных источниках и путях передачи возбудителей инфекционных заболеваний.
3. При проектировании и выборе места для строительства зданий, населенных пунктов и сельскохозяйственных объектов.
4. При решении вопросов водоснабжения, канализации и обеззараживания отбросов.
Стандартные методы санитарно-микробиологических исследований регламентированы ГОСТами, санитарными правилами (СП), санитарными правилами и нормами (СанПиН) и методическими указаниями (МУК) и техническими регламентами (ТР).
Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований.
1. Пробы для исследований следует отбирать с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта. Исследования необходимо проводить быстро; при невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 часов.
2. Для получения объективных результатов следует отбирать несколько проб из разных участков объекта.
3. Более адекватные результаты можно получить проведением повторных отборов и анализов проб.
4. При проведении анализов следует использовать только стандартные и унифицированные методы исследования.
5. Интерпретацию результатов санитарно-микробиологических исследований следует проводить с учетом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических).
Применяют 2 основных метода оценки санитарно-гигиенического состояния внешней среды:
1. Прямое обнаружение патогенных микроорганизмов
2. Появление косвенных признаков пребывания патогенных микроорганизмов во внешней среде.
Методы косвенной индикации применяют чаще.
При проведении исследований используют два критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде: общее микробное число (ОМЧ ) и содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ ).
ОМЧ определяют путем подсчета всех микроорганизмов (растущих на питательных средах) в 1 г или 1 мл субстрата.
Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ ) - условно-патогенные микробы, являющиеся облигатными представителями нормальной микрофлоры человека и животных, обнаружение которых во внешней среде свидетельствует о фекальном или воздушно-капельном загрязнении ее выделениями человека.
Основные характеристики СПМ.
1. СПМ должны постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.
2. СПМ не должны размножаться во внешней среде (исключая пищевые продукты)
3. Длительность выживания СПМ должна быть несколько больше, чем у патогенных микроорганизмов.
4. Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть не меньше, чем у патогенных микроорганизмов.
5. У СПМ не должно быть во внешней среде аналогов, с которыми их можно перепутать.
6. СПМ не должны изменяться во внешней среде.
7. Методы идентификации СПМ должны быть простыми.
1. Прямой подсчет числа бактерий с помощью специальных камер счетчиков.
2. Посев на питательные среды.
Титр СПМ - наименьший объем исследуемого материала или минимальное количество субстрата, в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.
Индекс СПМ - количество особей СПМ, обнаруженных в определенном объеме или определенном количестве исследуемого материала
Перевод индекса в титр и обратно производится делением 1000 на число выражающее индекс, или 1000 на число, обозначающее титр.
НВЧ (наиболее вероятное число) - вероятная оценка числа СПМ в определенном объеме воды или в определенном объеме другого субстрата. Этот показатель имеет доверительные интервалы, в пределах которых может колебаться с вероятностью 95%.
Все СПМ расценивают как индикаторы биологического загрязнения.
Группа А - индикаторы фекального загрязнения - включает обитателей кишечника человека и животных. Это бактерии группы кишечной палочки (БГКП)- эшерихии, сальмонеллы, цитробактерии. Группа А включает также энтерококки, протей, сульфитвосстанавливающие клостридии (Clostridium рerfringens и др.), термофилы, бактериофаги, бактероиды, синегнойную палочку, кандиды и аэромонады.
Группа В - индикаторы орального загрязнения. Включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки. Это зеленящие α и β-гемолитические стрептококки, стафилококки (гемолизирующие, плазмокоагулирующие, лецитиназа-положительные и антибиотикоустойчивые), в некоторых случаях также определяют вид золотистого стафилококка.
Группа С - индикаторы процессов самоочищения – сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде. К ним относят бактерии-протеолиты, бактерии-аммонификаторы и нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, целлюлозобактерии, бделловибрионы и сине-зеленые водоросли.
К основным СПМ относят БГКП, энтерококки, протеи, сальмонеллы, Clostridium perfringens , термофильные бактерии и бактериофаги энтеробактерий (колифаги).
Принципы, которыми руководствуются микробиологи при санитарно-микробиологических исследованиях, исходят из основной задачи, разрешаемой ими: определение возможности присутствия в исследуемом объекте патогенных микроорганизмов или токсинов, образующихся при их жизнедеятельности, а также обнаружение и оценка степени порчи пищевых продуктов.
Первым принципом является правильное взятие проб для санитарно-микробиологических исследований с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта, и правил стерильности. Ошибки, допущенные при взятии проб, приводят к получению неправильных результатов, и исправить их уже нельзя. При упаковке и транспортировке проб необходимо создавать такие условия, чтобы не допустить гибели или размножения исходной микрофлоры в исследуемом объекте, что может исказить результаты исследований. Поэтому одним из правил является, возможно, быстрое проведение исследований, и, если необходимо, сохранение материала только в условиях холодильника и не более 6-8 часов. Каждая проба сопровождается документом, в котором указывают название исследуемого материала, номер пробы, время, место взятия, характеристика объекта, подпись лица, взявшего пробу.
Второй принцип – проведение серийных анализов исходит из особенностей исследуемых объектов. Как правило, вода, почва, воздух и другие объекты содержат разнообразные микроорганизмы, распределение которых неравномерно. К тому же микроорганизмы, находясь в биоценотических отношениях, подвергаются взаимному влиянию, что ведет к гибели одних и активному размножению других. Поэтому берут серию проб из разных участков исследуемого объекта, по возможности большее количество проб, что позволит получить более достоверную характеристику объекта. Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала – среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.
Третий принцип – повторное взятие проб – необходимо для получения сопоставимых результатов. Это связано, прежде всего, с тем, что исследуемые объекты весьма динамичны (вода, воздух и т.п.), сменяемость микрофлоры в них во времени и пространстве очень велика. Патогенные микроорганизмы попадают в окружающую среду, как правило, в небольшом количестве, да и распределяются в ней равномерно. Поэтому повторное взятие проб позволяет более точно определить биологическую контаминацию объектов окружающей среды.
Четвертый принцип – применение стандартных и унифицированных методов, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями, что дает возможность получить сравнимые результаты.
Пятый принцип – использование при оценке исследуемых объектов одновременно комплекса тестов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики. Применяют прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов и косвенный - позволяющий судить о загрязнении объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени. К косвенным тестам относится определение общего микробного числа, количественного и качественного состава санитарно-показательных микроорганизмов. Применение косвенных методов оценки потенциальной возможности загрязнения объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, использование как бы обходного пути для изучения обсемененности материалов, является особенностью санитарно-микробиологических исследований.
Шестой принцип – заключается в проведении оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов при использовании санитарно-микробиологических тестов других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т.д.). Всегда необходимо учитывать, что развитие микробов тесно связано с другими факторами окружающей среды, которые могут оказывать как благоприятное, так и неблагоприятное влияние, усиливая или ограничивая возможности размножения патогенных микроорганизмов и накопления их токсинов. Следует учитывать и то, что почти любой объект исследования имеет собственную микрофлору, которая вызывает специфические биохимические процессы, и те изменения в объектах, которые обусловливаются посторонними микроорганизмами. Санитарный микробиолог должен хорошо знать ход биохимических процессов, происходящих в норме и в исследуемом объекте (сырье, пищевые продукты, готовом изделии и т.д.), технологию производства, уметь определить характер вредного воздействия попавших микробов, возможные последствия такого воздействия и рекомендовать конкретные мероприятия по их предупреждению. Нередко врачу приходится прибегать к помощи специалистов в области общей, сельскохозяйственной, промышленной, ветеринарной микробиологии и решать вопрос при непосредственном участии соответствующих специалистов.
Седьмой принцип – ответственность врачей санитарной службы за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов. При санитарно-микробиологическом исследовании выявляется степень порчи пищевых продуктов (или других объектов), пригодность их к употреблению, возможная опасность для здоровья населения. Если пищевые продукты возможно реализовать, врач должен дать обоснованную рекомендацию о наиболее рациональном способе их обработки и употреблении. Запрещается использовать пищевые продукты, воду водоемов и др. Закрытие предприятия из-за санитарного неблагополучия наносит определенный экономический ущерб. Ответственность за такое решение несет врач санитарной службы. Для большей объективности в оценке полученных результатов и заключениях врачи пользуются специальными инструкциями, нормативами, ГОСТами, разработанными профильными санитарно-микробиологическими учреждениями и утвержденными Министерством Здравоохранения. Эти стандарты периодически пересматриваются и приводятся в соответствие с изменениями, которые вытекают из практического опыта, материальных возможностей, современного уровня знаний и развития техники.
Читайте также:
|
При проведении санитарно-микробиологических исследований необходимо выполнять следующие требования.
1. Правильный отбор проб
Его проводят с соблюдением всех необходимых правил асептики; при хранении и транспортировке необходимо исключить возможность гибели и дополнительного размножения микроорганизмов. При невозможности немедленно сделать анализ материал хранят не более 6-8 часов.
2. Серийность проводимых анализов
Микроорганизмы в объектах окружающей среды распределены крайне неравномерно. Для получения адекватных результатов проводят отбор серии проб из разных участков объекта. При проведении анализов все образцы смешивают и отбирают среднюю пробу.
3. Повторность отбора проб
Для получения сопоставимых результатов осуществляют повторный отбор проб в связи с тем, что в исследуемых образцах состав микробиоты меняется достаточно быстро.
4. Применение стандартных методов исследования
Использование методик, утвержденных ГОСТ, позволяет получать в разных лабораториях сопоставимые результаты.
5. Использование комплекса тестов
Необходимо для получения адекватной информации при сочетании прямых и косвенных методов выявления микроорганизмов с учетом влияния факторов внешней среды и собственной микробиоты объекта.
Микробиологические основы ХАССП...
Глава 4. Источники и пути микробной контаминации.
Современная санитарная микробиология стремится использовать простые, точные и надежные методы. Они направлены на определение общей микробной загрязненности, выявления СПМ и включают:
Прямой подсчет при микроскопии микроорганизмов в объекте;
Методы выделения и идентификации микроорганизмов;
■- биологические методы с использованием лабораторных животных.
Прямой подсчет применяют в экстренных случаях при необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток - невозможность получить точный ответ из-за образования бактериями агломератов или прикрепления к частицам среды. Метод не позволяет отличать живые бактерии от погибших.
Посев на питательные среды производят для количественного подсчета. На плотных питательных средах подсчитывают число выросших колоний. При этом исходят из предположения, что каждая колония является результатом попадания на среду одной жизнеспособной клетки. Данный метод неточен, так как выявляет только группы микроорганизмов, растущих на определенных питательных средах при определенной температуре. Невозможно создать унифицированную, подходящую для всех микроорганизмов среду. Не все микроорганизмы, находящиеся в объекте, дают колонии на питательной среде из-за конкуренции и антагонизма.
Содержание числа живых клеток в объекте отражает показатель количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАМ), которое определяется путем подсчета колоний, выросших в агаризованной среде в чашках Петри при температуре 30±1°С в течение 3 дней (72±3). Это определение регламентировано Международной организацией по стандартизации методов микробиологического анализа (International Standart Organisation, ISO) и ГОСТ 10444.15-94. КМАФАМ выражается в колониеобразую-щих единицах (КОЕ) и рассчитывается на 1 г (см 3) образца.
Термин КМАФАМ КОЕ/г (см 3) наиболее полно характеризует определяемую принятыми методами группу микроорганизмов, поэтому в настоящее время его используют вместо обозначений, применявшихся ранее (общее количество бактерий, количество сапротрофов, гетеротрофов в 1 г (см 3), общее микробное число).
Микробиологические показатели безопасности пищевых продуктов для большинства групп микроорганизмов оценивают по альтернативному принципу, то есть нормируется масса продукта, в которой не допускается присутствие определенных видов микроорганизмов.
(предусматривают определение общей микробной обсеменённости (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов).
Санитарно-микробиологическое состояние почвы
оценивается на основании сопоставления количества термофильных бактерий и бакте-
рий – показателей фекального загрязнения. Почвы с преобладанием санитарно-показательных бактерий расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязнённые фекалиями человека или животных. Присутствие в почве E. coli и Enterococcus faecalis указывает на свежее (до 2 недель), бактерий родов Citrobacter и Enterobacter – на несвежее (до 2 месяцев), а Clostridium perfringens – на давнее (более 2 месяцев) фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения коли-индекса
– количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1 г почвы, перфрингенс-титра
– масса почвы (в граммах), в которой обнаружена 1 особь Clostridium perfringens, общего числа
сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий
в 1 г почвы.
Микробиологические нормативы для оценки санитарного состояния почвы:
– чистая почва: коли-титр – 1 и выше; перфрингенс-титр – 0,01 и выше; ОМЧ – 100-1000;
– загрязнённая почва: коли-титр – 0,9-0,01; перфрингенс-титр – 0,009-0,0001; ОМЧ – 1000-100000;
– сильно загрязнённая почва: коли-титр – 0,009 и ниже; перфрингенс-титр – 0,00009 и ниже; ОМЧ – 10000-4000000.
Для определения ОМЧ почву берут на глубине 10-15 см стерильным ножом (из разных мест не менее 10 проб) в стерильную банку. Из проб готовят навеску 30 г, которую вносят в колбу с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Готовят разведения 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 . Из 2-х последних разведений 0,1 мл смешивают с 40 мл 0,7% расплавленного и остуженного до 45 0 С МПА, после чего выливают двойным слоем в чашки с 2% агаром. Инкубируют в термостате. Подсчитывают количество выросших колоний.
Для определения коли-титра, перфрингенс-титра различные разведения почвенной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера. Инкубируют при 43 0 С 48 часов. При получении в средах газообразования и помутнения производят высев петлей на среду Эндо. Отбирают типичные для кишечной палочки колонии, делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При выявлении в мазках грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Если проба отрицательная, проверяют ферментативные свойства выделенной культуры посевом на полужидкую среду с глюкозой. Появление в среде кислоты и газа подтверждает наличие E. coli. Определяют коли-титр по наименьшему объёму, в котором обнаруживают БГКП.
Для определения перфрингенс-титра различные разведения почвенной суспензии засевают в пробирки со стерильной железосульфитной средой Вильсон-Блера. После 48 часов инкубации при 43 0 С учитывают результаты по образованию черных колоний C. perfringens в агаровом столбике среды. Мазки окрашивают по Граму, микроскопируют (крупные грамположительные палочки со спорами овальной формы, центрального или субтерминального расположения), вычисляют перфрингенс-титр (наибольшее разведение посевного материала, посев которого приводит к почернению и разрыву среды в первые 12 часов роста при 43 0 С).